Какова цель использования ddNTP?
Какова цель использования ddNTP?

Видео: Какова цель использования ddNTP?

Видео: Какова цель использования ddNTP?
Видео: Секвенирование по Сэнгеру 2024, Ноябрь
Anonim

DdNTP относится к Дидезоксинуклеотиды трифосфаты, которые используются в дидезокси-методе Сенгера для получения цепей ДНК различной длины для секвенирования ДНК. Это приводит к прекращению процесса полимеризации ДНК (или удлинения ДНК), поскольку для продолжения этого процесса требуется 3'-ОН группа.

Поэтому почему ddNTP используются при секвенировании?

Дидезоксинуклеотиды являются ингибиторами ДНК-полимеразы, удлиняющими цепь, использовал в методе Сэнгера для ДНК последовательность действий . Дидезоксирибонуклеотиды не имеют 3'-гидроксильной группы, поэтому дальнейшее удлинение цепи не может происходить, если этот дидезоксинуклеотид находится в цепи. Это может привести к обрыву ДНК. последовательность.

Точно так же присоединяются ли ddNTP к dNTP? Один или несколько дНТФ радиоактивно помечены, чтобы помочь визуализировать продукты репликации. Наконец, каждая пробирка получает один из четырех специальных нуклеотидов, называемых дидезоксинуклеотиды ( ddNTPs ). Однако после включения ДНК-полимераза не может дальше удлинять цепь, потому что ей нужен 3'-ОН для прикреплять к следующему нуклеотиду.

Точно так же можно спросить, как ddNTP останавливают реакцию секвенирования?

Когда присутствует в небольших количествах в секвенирование реакций , дидезоксирибонуклеозидтрифосфаты ( ddNTPs ) прекратить реакция секвенирования в разных положениях в растущих цепях ДНК. ddNTP останавливают реакцию секвенирования потому что они: заставляют ДНК-полимеразу отпадать от цепи матрицы. c.

Какой метод с использованием дидезоксинуклеотидов можно использовать?

Секвенирование по Сэнгеру - это метод секвенирования ДНК на основе селективного включения обрывающих цепь дидезоксинуклеотиды ДНК-полимеразой во время репликации ДНК in vitro. Разработанный Фредериком Сэнгером и его коллегами в 1977 году, он получил наибольшее распространение. использовал последовательность действий метод около 40 лет.

Рекомендуемые: