Что произойдет, если вы добавите слишком много рестрикционного фермента?
Что произойдет, если вы добавите слишком много рестрикционного фермента?

Видео: Что произойдет, если вы добавите слишком много рестрикционного фермента?

Видео: Что произойдет, если вы добавите слишком много рестрикционного фермента?
Видео: О подкормке удобрениями. 2024, Ноябрь
Anonim

Может произойти неполное пищеварение когда слишком много или тоже маленький фермент используется. В наличие загрязняющих веществ в в Образец ДНК жестяная банка подавлять ферменты , что также приводит к неполному пищеварению. Некоторые рестрикционные ферменты требуются кофакторы для полной активности.

Кроме того, почему рестрикционные ферменты добавляются в последнюю очередь?

В рестрикционный фермент обычно последний составная часть добавлен на реакцию, чтобы убедиться, что он не подвергается воздействию экстремальных условий. Собранную реакцию следует перемешать после фермент добавление. Смешайте все растворы, содержащие рестрикционные ферменты осторожно, чтобы избежать фермент инактивация.

Кроме того, как можно улучшить переваривание рестриктазами? Используйте не больше рекомендованного фермент количество (например, 10 единиц фермент на микрограмм ДНК). Уменьшите количество фермент в реакции, если необходимо. Избегайте длительной инкубации пищеварение реакция. Используйте рекомендуемый реакционный буфер.

Также знайте, почему рестрикционный фермент не режет?

Подготовка ДНК к расщеплению должен не содержать загрязняющих веществ, таких как фенол, хлороформ, спирт, EDTA, детергенты или избыточные соли, все из которых могут влиять на рестрикционный фермент деятельность. Если присутствует ингибитор (часто соль, ЭДТА или фенол), контрольная ДНК будет не вырезать после смешивания.

Почему количество фермента может вызывать звездную активность?

Звездная активность ослабление или изменение специфики ограничения фермент опосредованное расщепление ДНК, которое жестяная банка происходят в условиях реакции, существенно отличающихся от оптимальных для фермент . Звездная активность может происходят из-за присутствия Mg2+, в качестве является видно в HindIII, например.

Рекомендуемые: